胎牛血清,由胎牛血漿去除纖維蛋白而形成的一種很復雜的混合物,其組成成份雖大部分已知,但還有一部分尚不清楚,且血清組成及含量常隨供血動物的性別、年齡、生理條件和營養條件不同而異。血清中含有各種血漿蛋白、多肽、脂肪、碳水化合物、生長因子、激素、無機物等,這些物質對促進細胞生長或抑制生長活性是達到生理平衡的。牛血清是細胞培養中用量大的天然培養基,含有豐富的細胞生長必須的營養成份,常用于動物細胞的體外培養,具有極為重要的功能:提供對維持細胞指數生長的激素,基礎培養基中沒有或量很少的營養物,以及主要的低分子營養物。有些情況下結合蛋白質能與有毒金屬和熱原質結合,起到解毒作用。起酸堿度緩沖液作用。胎牛血清還是細胞貼壁、鋪展在塑料培養基質上所需因子來源,并提供結合蛋白,能識別維生素、脂類、金屬和其他激素等,能結合或調變它們所結合的物質活力。除此之外,胎牛血清在細胞消化過程中提供蛋白酶抑制劑,使在細胞傳代時使剩余胰蛋白酶失活,保護細胞不受傷害。
防止胎牛血清在培養中產生黑點的有效方法:
(1) 盡可能地減少血清凍融次數。
(2) 培養基無需 37℃水浴。
(3) 培養基保持JIA PH 值 7.0- 7.2。
(4) 嚴格控制配制培養基的水質,容器定期刷洗。
(5) 掌握細胞傳代的JIA時機,細胞切勿生長過老。
1、 化凍
將血清從-20 度冰箱中取出,室溫(或浸于自來水中)化凍(約需要 30 分鐘至 2 小時,也可放于 4 度冰箱化凍過夜;化凍后若不馬上滅活,可以放入 4 度冰箱中暫時保存)
2、滅活
(1)放入室溫的水浴鍋內開始加熱(同時放入一個空的血清瓶,內裝 100ml 自來水,插入一根溫度 計,溫度監控以此為準)
(2)當溫度計顯示 56 度時,停止加熱,改為間斷加熱,維持 56 度(±0.5 度)30 分鐘(±3 分鐘; 若不小心使溫度上升超過 56 度,則:若仍未超過 60 度,且時間很短,比如不超過 5 分鐘,則仍可使 用;若超過 60 度,或者時間較長,則棄去不用,或者嘗試用于一些普通細胞的培養)
(3)取出,自然冷卻至室溫(約需 1-3 小時) ,可分裝或-20 度繼續凍存。
3、分裝
(1)轉入無菌間,在超凈臺內將血清分裝入 10ml 離心管中(注意預先要將血清輕輕搖動數周、混勻; 用吸液管或吹大管吹出血清時要注意:不要吹出氣泡(血清很粘稠,很容易產生氣泡;如果產生氣泡, 則在酒精燈火焰上過一下) )
(2)放入-20 度冰箱凍存
(3)全部操作約需要 4-6 小時
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