胎牛血清是一種性狀、外觀 淺黃色澄清、無溶血、無異物稍粘稠液體。胎牛血清應取自剖腹產的胎牛。顯然,胎牛血清是品質zui高的,因為胎牛還未接觸外界,血清中所含的抗體、補體等對細胞有害的成分少。
胎牛血清使用中常見問題的解答:
1、問:加到培養基中的血清必須滅活嗎?
答:不是必須的,看做什么實驗了。
2、問:胎牛血清滅活是56℃ 30分鐘嗎?
答:如果用于培養大多數的腫瘤細胞,血清一般是不需要滅活的,這樣可以有效保存血清中的生長因子。 但是如果用于培養一些表面具有補體受體的細胞,如內皮細胞,血清是 需要滅活,一般是56℃,30min。
3、問:我要做滋養細胞培養,胎牛血清要滅活嗎?
答:進口的一般都已滅活,國產的不一定,盡量還是滅活一下再用較安全。
4、問:我用病毒上清轉染細胞,培養用的血清需要滅活嗎?
因為血清中可能有些補體和抗體,是不是會影 響轉染?我想未滅活的血清中含些抗體補體可能會和病毒相結合,影響 轉染,正確嗎?細胞是單核細胞白血病細胞, 病毒是病毒包裝細胞PT67收集的病毒上清。為什么要用無血清培養基加病毒孵育幾小時,目的是什么?
答:血清一定要滅活,可以先用無血清培養基加病毒孵育幾小時以后再加血清。避免雜蛋白對病毒和宿主 結合過程的干擾,一般是2-6小時,根據細胞的狀態決定。血清不一定需 要滅活,滅活的目的是將血清中的補體滅活 !這要根據實際情況而定,如果沒有把握那就滅活吧,也不麻煩56度半個小時。
5、問:因為實驗室水浴鍋失控,血清滅活時,溫度到了61.7℃,這血清還能用嗎?
答:多長時間啊?短時間應該可以吧,我有一次加熱了一個多小時,還照樣用。
6、問:我滅活胎牛血清時,用的電磁爐,定在了70℃,本來說調溫度到56℃再放血清的,后來忘了,就把 血清放進去了,所以滅活的溫度肯定超過56℃了,不知道這樣對血清 有沒有影響?
答:常規滅活建議的溫度在45℃到62℃之間,而時間則從15分鐘到60分鐘不等,其中常用的手法是56℃ 熱處理30分鐘。看看你養的細胞是什么,一般的話估計問題不大,要是 很珍貴的細胞還是慎重一點啊。熱滅活目的是 為了去除血清中補體等對熱敏感的物質, 在對補體滅活以外,熱處理同時也對血清中可能存在的支原體具有滅活作 用。現在好像不主張熱 滅活,熱滅活經常給血清產品帶來負面影響,對血清的加熱經常導致血清中沉淀的產生,此外 ,有研究結果證實熱滅活步驟減弱了胎牛血清和小牛血清對細胞的促粘附作用。
胎牛血清主要用途:
牛血清是細胞培養中用量大的天然培養基,含有豐富的細胞生長必須的營養成份,常用于動物細胞的體外培養,具有極為重要的功能。
1.提供對維持細胞指數生長的激素,基礎培養基中沒有或量很少的營養物,以及主要的低分子營養物。
2. 提供結合蛋白,能識別維生素、脂類、金屬和其他激素等,能結合或調變它們所結合的物質活力。
3.有些情況下結合蛋白質能與有毒金屬和熱原質結合,起到解毒作用。
4.是細胞貼壁、鋪展在塑料培養基質上所需因子來源。
5.起酸堿度緩沖液作用。
6.提供蛋白酶抑制劑,使在細胞傳代時使剩余胰蛋白酶失活,保護細胞不受傷害。