以外泌體為代表的細胞外囊泡是近幾年研究的熱點,目前的外泌體研究主要通過研究體外培養細胞來源的外泌體,分析其在體內外的功能作用。一般的血清FBS中含有供體細胞自然分泌的大量Exosomes,而用于Exosome研究的細胞必須提前更換無外泌體的血清進行培養,以減少對后續實驗結果的污染。
目前市面上存在著商業化的無外泌體血清,然而由于其價格較高等因素,很多研究者選擇自己制備無外泌體血清,而常用的主要是基于超速離心的無外泌體血清分離方法
無外泌體血清制備步驟:
1. 根據需要處理的血清體積選擇合適的轉子與超離管。
2. 在超凈工作臺,將普通血清置于超離管中,配平后,進行熱封口。
3. 將封口后的超離管放于離心機轉子中,并加入相應適配器然后擰緊轉頭蓋。
4. 設置離心程序:4℃,120,000 ×g,離心18小時(也有研究者選擇100,000 ×g離心18小時【2】)。
5. 離心結束后,回收上清液,為避免污染,在超凈工作臺操作。
6. 收集得到無外泌體血清,并儲存于-20℃中備用。
無外泌體血清產品特點:
1、專為外泌體研究而設計;
2、無菌采集的健康胎牛血清過濾法去除外泌體;
3、胎牛血清內源外泌體去除率達97%;
4、過濾法可有效保護FBS中重要的細胞營養因子;
5、培養的細胞生長速率與形態與普通FBS無差異。
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